純化水集菌儀適用范圍:

1、制藥行業(yè)：純化水、注射用水、無菌制劑（大輸液、小針劑、粉劑、生物制品、血液制品、眼用制劑、保養(yǎng)液等）的無菌檢查和微生物限度檢查；

2、醫(yī)療器械行業(yè)：純化水、注射用水、注射器、靜脈導(dǎo)管等的無菌檢查和微生物限度檢查；

3、食品、飲料行業(yè)；

4、環(huán)保行業(yè)等。

主要特征：

1、新型泵頭：過濾更順暢，更均勻，更安全。

2、固定檔位設(shè)計(jì)：設(shè)有“40R"“ 60 R"“ 160R"“ 240R" 四大檔 位，可以滿足大輸液、粉針、水針等各種劑量供試品的過濾需求。

3、分體式的排液槽設(shè)計(jì)：可以自由移動(dòng)，方便操作人員的操作習(xí)慣。槽內(nèi)為弧形設(shè)計(jì)，廢液不會殘留在槽內(nèi)，解決了長期實(shí)驗(yàn)后可能會產(chǎn)出的細(xì)菌。

4、瓶形支架設(shè)計(jì)：解決了傳統(tǒng)的大瓶支架、小瓶支架更換帶來的麻煩 和操作過程中供試品掉下來的風(fēng)險(xiǎn)。瓶形支架將供試品牢牢固定在支架上，即安全，又美觀。

5、智能集菌儀圓形卡口設(shè)計(jì)：傳統(tǒng)式直角卡口在裝軟管的時(shí)候都是很費(fèi)勁的，有時(shí)候還會把管子卡破，造成了經(jīng)濟(jì)上的損失，現(xiàn)在圓形卡口，可以輕輕一卡，軟管就可以進(jìn)去，非常方便。

6、一體化開關(guān)設(shè)計(jì)：避免在機(jī)殼上開過多的孔，使機(jī)殼的清潔度更高，更人性化。

7、扳手根據(jù)人體力學(xué)設(shè)計(jì)而成，可以輕松將皮管卡牢。

8、增設(shè)腳踏開關(guān)，更便于實(shí)驗(yàn)操作。

集菌儀和微生物檢驗(yàn)儀（通常指微生物限度檢測儀）的主要區(qū)別如下：
用途：集菌儀主要用于無菌產(chǎn)品的無菌檢測，如注射用無菌制劑、抗生素類及含有抑菌成份的藥品、大輸液、水針劑、滅菌醫(yī)療器具、無菌注射用水等。而微生物限度檢測儀用于非無菌產(chǎn)品的微生物限度檢測，如純化水、初始污染菌等。
操作方式：集菌儀通過定向蠕動(dòng)加壓作用，供試品被過濾并在濾器內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，可直接灌注培養(yǎng)基到濾膜背面，然后直接培養(yǎng)。微生物限度檢測儀則采用負(fù)壓抽濾，將供試品中微生物截留在濾膜上，用取膜器取出濾膜，轉(zhuǎn)移至配置好的固體培養(yǎng)基上，菌面朝上，平貼，蓋上蓋子形成封閉的培養(yǎng)盒，置于相應(yīng)的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)并計(jì)數(shù)。
價(jià)格：集菌儀相對微生物限度檢測儀更貴，微生物限度檢測儀比較便宜。
結(jié)構(gòu)和設(shè)計(jì)：集菌儀是集菌培養(yǎng)器的配套使用儀器，通常采用全封閉式設(shè)計(jì)，避免在微生物檢測過程中受到外界環(huán)境的污染。微生物限度檢測儀一般采用不銹鋼金屬材料制成，配有內(nèi)置或外置隔膜液泵，可整體滅菌和單獨(dú)滅菌，單獨(dú)配備的泵也滿足了收集有價(jià)值的廢液等要求。
綜上所述，集菌儀和微生物限度檢測儀在用途、操作方式、價(jià)格和結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)上存在明顯差異，用戶應(yīng)根據(jù)實(shí)際檢測需求選擇合適的儀器

純化水集菌儀基于濾膜上細(xì)菌直接計(jì)數(shù)法的細(xì)菌總數(shù)快速檢測
【摘要】 細(xì)菌總數(shù)快速檢測在質(zhì)量監(jiān)測中具有重要的意義，目前除了經(jīng)典的平板培養(yǎng)法以外，還有微菌落法、阻抗法等快速檢測方法，這些方法或者需要較長的檢測時(shí)間，或者需要較高的檢測成本。本研究提出一種不需要培養(yǎng)而在濾膜上直接計(jì)數(shù)的細(xì)菌總數(shù)的快速檢測方法，它主要分為過濾、染色、顯微鏡計(jì)數(shù)和計(jì)算四個(gè)步驟。計(jì)算細(xì)菌總數(shù)時(shí)，根據(jù)細(xì)菌在濾膜上的分布特點(diǎn)，對傳統(tǒng)公式進(jìn)行改進(jìn)，提出按區(qū)域計(jì)算細(xì)菌總數(shù)的計(jì)算方法，提高了檢測精度。研究結(jié)果表明，該方法與傳統(tǒng)的平板培養(yǎng)法無顯著性差異（t=0.847，P=0.436＞0.05），是一種低成本、快速的細(xì)菌總數(shù)檢測方法。
1 引 言
細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)的研究已有很多，目前國標(biāo)規(guī)定的方法為平板計(jì)數(shù)法，該方法是將樣品加入瓊脂營養(yǎng)基，在37 ℃下培養(yǎng)24～48 h后計(jì)數(shù)。這種方法精度高，但耗時(shí)長，難以滿足實(shí)際工作需要。為了簡化檢測程序、縮短檢測時(shí)間，國內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了大量的快速檢測方法的研究，提出了阻抗檢測法〔1〕、Simplate TM全平器計(jì)數(shù)法〔2〕、微菌落技術(shù)〔3-5〕、紙片法〔6-7〕等檢測方法，取得了的成果，但檢測時(shí)間仍在4 h以上。
本研究在分析了已有研究成果的基礎(chǔ)上，提出了在濾膜上染色后，直接計(jì)數(shù)的細(xì)菌總數(shù)檢測方法，具體步驟為：用集菌儀進(jìn)行細(xì)菌收集→在膜上進(jìn)行染色→在油鏡下計(jì)數(shù)→按公式計(jì)算出菌液濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法與傳統(tǒng)的平板培養(yǎng)法無顯著性差異，檢測時(shí)間約1 h，是一種快速的細(xì)菌總數(shù)檢測方法。
2 材料與方法
2.1 材料
本研究中用的試驗(yàn)材料有集菌儀（杭州泰林生物技術(shù)設(shè)備有限公司），染色劑，生物顯微鏡（寧波永新光學(xué)股份有限公司），聚碳酸脂膜（直徑47 mm）。
2.2 實(shí)驗(yàn)方法
2.2.1 準(zhǔn)備工作 卸下集菌儀的濾網(wǎng)（見圖1），統(tǒng)計(jì)濾網(wǎng)上小孔總數(shù)，為計(jì)算菌液濃度做準(zhǔn)備。另外，還需對集菌儀中的集菌器進(jìn)行高壓滅菌，以防止過濾過程中引入外源細(xì)菌。
2.2.2 細(xì)菌收集 取濃度的霉菌菌液300～500 ml，裝在集菌儀上，集菌儀采用蠕動(dòng)加壓方式對菌液施加的壓力，使菌液流過孔徑為0.45 um的聚碳酸脂膜。采用過濾方法是因?yàn)樗梢允辜?xì)菌相對均勻地分布在濾膜上，而選用聚碳酸脂膜是因?yàn)檫@種膜具有良好的透光性，便于用顯微鏡觀察。
2.2.3 染色 集菌后取下濾膜，切下一部分放在載玻片上，進(jìn)行染色、固定。染色的目的是增大細(xì)菌與背景的對比度，便于觀察。
2.2.4 顯微鏡計(jì)數(shù)與計(jì)算 菌液經(jīng)集菌儀過濾后，細(xì)菌在濾膜上的分布見圖2、圖3，由圖可以看出細(xì)菌分布具有以下兩個(gè)特點(diǎn)：一是細(xì)菌集中在一個(gè)個(gè)的圓形區(qū)域內(nèi)，這些圓形區(qū)域和擋板的小孔相對應(yīng)；二是各個(gè)圓形區(qū)域之間細(xì)菌很少。根據(jù)膜上細(xì)菌分布的這種特點(diǎn)，提出以圓形區(qū)域?yàn)閱挝贿M(jìn)行計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)出圓形區(qū)域內(nèi)細(xì)菌的平均個(gè)數(shù)，從而計(jì)算出菌液中細(xì)菌總數(shù)。具體步驟如下：隨機(jī)選擇10個(gè)圓形區(qū)域，在油鏡下，調(diào)節(jié)焦距以獲得較清晰的圖像（見圖4），統(tǒng)計(jì)每個(gè)圓形區(qū)域內(nèi)的細(xì)菌個(gè)數(shù)，然后按公式(1)計(jì)算出菌液的濃度。
X=A10×N/V(1)圖2 膜上細(xì)菌的區(qū)域分布
Fig 2 The distributing region of bacteria on the filter(100倍)
圖3 膜上細(xì)菌的區(qū)域間隔
Fig 3 The space among the distributing regions(100倍)
圖4 膜上細(xì)菌染色后圖像
Fig 4 Figure of bacteria after coloration(1 000倍)
式中：X表示待檢菌液濃度（CFU/ml）
A表示10個(gè)圓形區(qū)域內(nèi)細(xì)菌總數(shù)
N表示濾網(wǎng)上小孔總數(shù)
V表示集菌時(shí)所用待檢菌液體積（ml）
3 結(jié)果與討論
3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
按上述方法計(jì)算得到的結(jié)果與平板培養(yǎng)法得到的結(jié)果見表1。表1 兩種方法得到的細(xì)菌總數(shù)
Table 1 Total bacteria number by two different methods
樣本1樣本2樣本3樣本4樣本5樣本6染色鏡檢
(cfu/ml）185168157165171166平板培養(yǎng)
(cfu/ml)176155165158183152
對表1中兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行配對t檢驗(yàn)，在α=0.05時(shí)，雙尾檢驗(yàn)結(jié)果如下：t=0.847，P=0.436＞0.05，說明兩種方法得到的結(jié)果無顯著性差異。
3.2 討論
3.2.1 計(jì)算公式的改進(jìn) 用集菌儀對樣本菌液進(jìn)行過濾時(shí)，由于濾網(wǎng)擋板的作用，使得細(xì)菌不是均勻地分布在整個(gè)濾膜上，而是集中分布在濾網(wǎng)的小孔處，所以，計(jì)算細(xì)菌總數(shù)時(shí)，不能采用公式X=A40×Φ1Φ22/V（其中Φ1，Φ2分別為濾膜直徑和視野直徑），該公式是微菌落方法檢測細(xì)菌總數(shù)中的常用計(jì)算公式。在本實(shí)驗(yàn)中，根據(jù)細(xì)菌分布的特點(diǎn)，提出以圓形區(qū)域?yàn)閱挝挥?jì)算細(xì)菌總數(shù)的思路，使計(jì)算結(jié)果更接近真實(shí)值，從而提高了檢測精度。
3.2.2 細(xì)菌大小的影響 細(xì)菌大小對本實(shí)驗(yàn)的影響主要體現(xiàn)在鏡檢時(shí)，如果細(xì)菌太小，顯微鏡計(jì)數(shù)時(shí)不能將細(xì)菌從背景中分辨出來，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不能分辨大腸桿菌和葡萄球菌，而較大的霉菌可以清晰地分辨。
3.2.3 檢測時(shí)間進(jìn)一步縮短 細(xì)菌總數(shù)的經(jīng)典檢測方法是平板培養(yǎng)法，得到的結(jié)果精度高，但是它所用時(shí)間長，為了縮短檢測時(shí)間，出現(xiàn)了微菌落法，將檢測時(shí)間縮短為4 h左右〔3-5〕。本研究不對細(xì)菌進(jìn)行培養(yǎng)，而是在膜上染色后直接用顯微鏡計(jì)數(shù)，大限度地縮短了檢測時(shí)間，使整個(gè)檢測時(shí)間在1 h左右。
4 結(jié)論
本研究用集菌儀將菌液過濾后，取濾膜一部分進(jìn)行染色、制片，然后在油鏡下統(tǒng)計(jì)細(xì)菌個(gè)數(shù)。根據(jù)細(xì)菌在濾膜上的分布特點(diǎn)，提出將圓形區(qū)域作為統(tǒng)計(jì)單位，得到圓形區(qū)域內(nèi)細(xì)菌的平均個(gè)數(shù)，從而計(jì)算出菌液濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，按照該方法得到的結(jié)果與平板培養(yǎng)法的結(jié)果無顯著性差異。與平板培養(yǎng)法和微菌落法相比，該方法不需要細(xì)菌培養(yǎng)，檢測時(shí)間只需要1 h左右，明顯縮短了檢測時(shí)間，是一種快速、有效的細(xì)菌總數(shù)檢測方法。